配液有技巧，34招教你學(xué)會實(shí)驗(yàn)室常用貯存液的配制

配液有技巧，34招教你學(xué)會實(shí)驗(yàn)室常用貯存液的配制

古人云:“常在河邊走哪有不濕鞋?”一不小心:“哎?那個**溶液怎么配來著?”別擔(dān)心小析姐整理好各種溶液的配置方法，記得收藏噢。一起來看下吧。

寫在前面

1

30%丙烯酰胺溶液

『配制方法』

將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中. 加熱至37℃溶解之，補(bǔ)加水至終體積為100ml.用0.45μm孔徑濾器過濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。

〖注意〗

丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性. 稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具. 可認(rèn)為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作. 因?yàn)樗€可能會含有少量未聚合材料. 有些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt)，攪拌過夜，然后過濾以純化之(建議使用Whatman 1號濾紙過濾，鴻躍公司有售). 在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸.

2

40%丙烯酰胺

『配制方法』

把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中. 繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L.

〖注意〗

見上述配制30%丙烯酰胺的說明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定.

3

放線菌素D溶液

『配制方法』

把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值. 放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20℃.

〖注意〗

放線菌素D是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚.

另，藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑. 只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用.

4

0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

『配制方法』

在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于-70℃.

5

10mol/L乙酸酰溶液

『配制方法』

把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌.

6

10%過硫酸銨溶液

『配制方法』

把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數(shù)周.

7

BCIP溶液

『配制方法』

把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃.

8

2×BES緩沖鹽溶液

『配制方法』

用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na 2 HPO 4，室溫下用HCl調(diào)節(jié)該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20℃.

9

1mol/L CaCl2溶液

『配制方法』

在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl 2 6H 2 O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃.

〖注意〗

制備感受態(tài)細(xì)胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌，然后驟冷至0℃.

10

2.5mol/L CaCl2溶液

『配制方法』

在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl 2 6H 2 O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃.

11

1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液

『配制方法』

用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃.

〖注意〗

DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理.

12

脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

『配制方法』

把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié)每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測)，把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋，在給出的波長下讀取光密度計(jì)算出每種dNTP的實(shí)際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70℃.

13

0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

『配制方法』

在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用.

〖注意〗EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0，才能完全溶解.

14

溴化乙錠(10mg/ml溶液)

『配制方法』

在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫,

〖注意〗

溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套，稱量染料時要戴面罩.

15

2×HEPES緩沖鹽溶液

『配制方法』

用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na 2 PO 4、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml. 用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成5ml小份，貯存于-20℃.

16

IPTG溶液

『配制方法』

IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3)，在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃.

17

1mol/L乙酸鎂溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L過濾除菌.

18

1mol/L MgCl2溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解203.4g MgCl 2‘’6H2O，用水定容至1L，分裝成小份并高壓滅菌備用.

〖注意〗

MgCl 2極易潮解，應(yīng)選購小瓶(如100g)試劑，啟用新瓶后勿長期存放.

19

β-巰基乙醇(BME)溶液

『配制方法』

一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4℃.

〖注意〗

BME或含有BME的溶液不能高壓處理.

20

NBT溶液

『配制方法』

把0.5g氯化氮藍(lán)四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃.

21

酚/氯仿溶液

『配制方法』

把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L TriHCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/l Trisl(pH7.6)液層，保存于4℃.

〖注意〗

酚腐蝕性很強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡，穿防護(hù)服.所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行.與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇.

22

苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液.

『配制方法』

用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L)，分裝成小份貯存于-20℃.如有必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L).

〖注意〗

PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之.被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄.PMSF在水溶液中不穩(wěn)定. 應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中. PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃. pH值為8.0時，20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時后，可安全地予以丟棄.

23

磷酸鹽緩沖溶液(PBS)溶液

『配制方法』

在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na 2 HPO 4和0.24g KH 2 PO 4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min. 保存于室溫.

24

1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液

『配制方法』

將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中，用2mol/L乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.5后加入純水定容到1L，保存于-20℃.

25

乙酸鉀溶液(用于堿裂解)

『配制方法』

在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液.

26

乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液

『配制方法』在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.0，加水定容到1L，分裝后高壓滅菌.

27

5mol/L NaCl溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分裝后高壓滅菌.

28

10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液

『配制方法』

在900ml水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分裝備用.

〖注意〗SDS的微細(xì)晶粒易擴(kuò)散，因此稱量時要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10%SDS溶液無須滅菌

29

20×SSC溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/l NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌

30

20×SSPE溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH 2 PO 4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4(約需6.5ml 10ml/L NaOH)，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌.

31

100%三氯乙酸溶液

『配制方法』

在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%(M/V)TCA.

32

1mol/L Tris溶液

『配制方法』

在800ml水中溶解121.91g Tris堿，加入濃HCl調(diào)節(jié)pH值至所需值. 應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌.

〖注意〗

如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris. Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1℃，pH值大約降低0.03個單位. 例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時的pH值分別為9.5、8.9和8.6.

33

Tris緩沖鹽溶液(TBS)

『配制方法』

在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存.

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X-gal溶液

『配制方法』

用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液.保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20℃. X-gal溶液無須過濾除菌.

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