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      DNA病毒基因組提取試劑盒

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      Cas號
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      分子式
      分子量
      產(chǎn)品參數(shù) 產(chǎn)品簡介:

      本試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組,不適合于RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

      操作步驟:

      使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

      1、 取病毒上清液0.5ml,12000rpm離心5min,盡量吸盡上清使用,棄去沉淀。

      2、 向病毒上清中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混勻,65℃消化10-20min,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

      3、 向管中加入500ul結(jié)合液,充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,靜置2min。(吸附柱的最大容積為750ul,可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。)

      4、 12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      5、 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      6、 向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      7、 12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除, 否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

      8、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心1min。

      9、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的病毒基因組DNA。

      注意事項:

      1、蛋白酶K需放置-20℃保存。

      2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

      3、若結(jié)合液中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解再使用,不影響效果。

      4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過小會影響回收效率。洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

      5、DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。D260值為1.0相當(dāng)于大約50 ug/ml雙鏈DNA、40 ug/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

      6、如果病毒含量過低,最后提取的基因組DNA電泳可能無法檢測到,但PCR等其他實驗還會有結(jié)果。
      性狀 試劑盒內(nèi)容: 50T 100T
      蛋白酶K 1ml 1ml×2
      結(jié)合液 25ml 50ml
      漂洗液 15ml 15ml×2
      洗脫液 10ml 20ml
      吸附柱 50個 100個
      收集管 50個 100個
      說明書 1份 1份
      貯存 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。
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