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      全血基因組DNA提取系統

      英文名:
      Cas號:
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      13081111531-200ml(處理血量) 200 現貨 0 ¥1584
      - +
      13081111532-50ml(處理血量) 50 現貨 0 ¥660
      - +
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      別 名
      Cas號
      M D L
      分子式
      分子量
      產品參數 50 200
      10×紅細胞裂解液30ml 120ml
      白細胞裂解液 30ml 120ml
      蛋白沉淀液 30ml 120ml
      DNA溶解液 15ml 60ml

      產品說明:

      產品適用于處理新鮮的或已經添加抗凝劑的血液樣品,采用異丙醇沉淀方法,操作簡便,尤其適合大量提取血液基因組DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常規分子生物學實驗。少量樣本也可選購我公司吸附柱型試劑盒(D1800 全血基因組DNA提取試劑盒)。

      本產品使用前請根據使用量將10×紅細胞裂解液用水稀釋成1×的即用型紅細胞裂解液。

      處理血液量 1ml 5ml 10ml
      紅細胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml
      白細胞裂解液 0.5ml 2.5ml 5ml
      蛋白沉淀液 1ml 2.5ml 5ml
      異丙醇 1ml 5ml 10ml
      75%乙醇 1ml 5ml 10ml
      DNA溶解液 100ul 0.5ml 1ml

      操作步驟:

      以1ml全血為例

      1、樣品的處理:在血液中加入3倍體積的1×紅細胞裂解液(請確認已經稀釋過),充分顛倒混勻,12000rpm離心1min(如為大量提取并且為大離心機,可11000轉離心5min),小心吸去上清,再加入2倍體積的1×紅細胞裂解液,用移液器輕輕吹打沉淀,充分混勻,離心,棄上清,沉淀為白細胞。

      2、向沉淀中加500ul白細胞裂解液,振蕩或者用移液器吹打至徹底混勻。65℃水浴10-20min,期間可顛倒離心管混勻數次,直至溶液較為清澈看不見明顯細胞為止。

      3、加入500ul蛋白沉淀液,充分顛倒混勻,此時會出現白色沉淀,65℃水浴5min,12000rpm離心5min,小心吸取上清(不要吸到下層沉淀或漂浮不溶物),轉移到干凈離心管中,如還有沉淀物,可再次離心。

      4、在上清中加入1ml異丙醇,混勻。12000rpm離心5min,可看到管底有少量白色DNA沉淀,棄掉上清。

      5、向離心管中加入1ml 75%乙醇,12000rpm離心5min,棄去上清液。可再次短暫離心用移液器去除殘余上清。

      6、將離心管敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,否則乙醇可能影響后續的實驗如酶切、PCR等。

      7、向離心管中加入100-300ul DNA溶解液,室溫放置讓DNA自然溶解。如果DNA難于溶解,可室溫放置過夜或將離心管置于50-60℃水浴中水浴加熱5min。

      注意事項:

      1、樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

      2、若試劑盒中的溶液出現沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。

      3、DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為1相當于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
      性狀
      貯存 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。
      本網站銷售的所有產品僅用于工業應用或者科學研究等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或者治療,非藥用,非食用。
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