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      無內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒

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      分子式
      分子量
      產(chǎn)品參數(shù) 產(chǎn)品簡介:本試劑盒采用可以特異性結(jié)合核酸的硅基質(zhì)膜和堿裂解法提取細(xì)菌質(zhì)粒DNA,從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,可快速提取200-300μg純凈地高拷貝質(zhì)粒DNA。所采用的內(nèi)毒素清除劑能有效地去除質(zhì)粒溶液中的內(nèi)毒素,純化的質(zhì)粒內(nèi)毒素含量小于0.1EU/ug。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)試驗,包括酶切、PCR、測序、連接、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染等試驗。本試劑盒無需使用酚、氯仿等有毒試劑,操作安全。

      注意事項:

      1、溶液P1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA全部加入),混勻,置于2-8℃保存。
      2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。

      3. 使用前請先檢查溶液P2、P3和P4是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。

      4. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于500ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍), pH值低于7. 0會降低洗脫效率, DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

      5. 質(zhì)粒DNA濃度>1mg/ml時清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒DNA本身的性質(zhì),清除過程可導(dǎo)致部分質(zhì)粒DNA丟失,但內(nèi)毒素卻能得到最大限度清除。

      6. 所有溶液應(yīng)用無內(nèi)毒素的高純水配制,所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。

      7. DNA濃度及純度檢測:得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低
      性狀 試劑盒組成 10T
      RNase A 1ml
      內(nèi)毒素清除劑 100ml
      溶液P1 40ml
      溶液P2 40ml
      溶液P3 40ml
      溶液P4 120ml
      漂洗液 15×2ml
      洗脫液 30ml
      吸附柱 10個
      收集管 20個
      說明書 1份
      貯存
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