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      質粒大量提取試劑盒

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      別 名
      Cas號
      M D L
      分子式
      分子量
      產(chǎn)品參數(shù) 產(chǎn)品說明:

      本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物,一般從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,可快速提取200-300μg高純度高拷貝的質粒DNA,提取率達85-90%。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

      注意事項:

      1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入),混勻,置于2-8℃保存。

      2、第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在漂洗液中加入無水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇。

      3、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象 可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。

      4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即蓋緊蓋子,如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心。

      5、如果是提取革蘭氏陽性菌質粒,必須在裂解細胞前破細胞壁,方法如下:收集適量菌體,加入5ml溶液Ⅰ,充分懸浮菌體,加入溶菌酶至終濃度為10-20mg/ml,37℃處理30min左右。加入溶菌酶的濃度和處理時間可根據(jù)不同的菌株和具體試驗條件進行調整。還可以選擇D1120、D1130革蘭氏陽性菌質粒提取試劑盒。

      6. 洗脫緩沖液體積不應少于500ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍), pH值低于7. 0會降低洗脫效率。 DNA產(chǎn)物應保存在-20℃,以防DNA降解。

      7. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒,應加大菌體使用量,使用400-800ml過夜培養(yǎng)物,同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間,以增加提取效率。

      8. DNA濃度及純度檢測:得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。
      性狀 試劑盒內容:

      RNaseA ( 10mg/ml ) 1ml
      溶液Ⅰ 60ml
      溶液Ⅱ 60ml
      溶液Ⅲ 80ml
      漂洗液 2×15ml
      洗脫液 30ml
      吸附柱 10個
      收集管(50ml) 10個
      說明書 1份
      貯存 常溫保存,復檢期一年。
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