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      聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒

      英文名:
      Cas號(hào):
      檢測(cè)信息查詢
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      別 名
      Cas號(hào)
      M D L
      分子式
      分子量
      產(chǎn)品參數(shù) 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
      本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的硅基質(zhì)材料和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),從聚丙烯酰胺凝膠上回收DNA片段,同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用本試劑盒回收的DNA可適用于后續(xù)各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR 、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。

      操作步驟:
      第一次使用前請(qǐng)先在15ml漂洗液中加入60ml無(wú)水乙醇,所有離心步驟均可使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
      1 .將單一的目的 DNA條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下(盡量切除多余部分),放入 1.5ml 離心管中,稱取重量,用研磨杵將膠盡量擠壓碎。加入 2 倍體積的溶液A 吹打混勻(每 100mg 膠加入200ul 溶液A),75℃水浴30分鐘。
      2 .用1ml 的去尖吸頭吸取混合物至過(guò)濾柱中(將膠一起吸入,溶液過(guò)多時(shí)可分次加入)。13,000rpm 離心1分鐘。將收集管中的濾出液轉(zhuǎn)入新離心管中。
      3. 取六倍體積溶液 B 加入原離心管中(每 100mg 膠加入600ul),清洗管壁后加入過(guò)濾柱中(溶液過(guò)多時(shí)可分次加入),顛倒過(guò)濾柱或輕輕吹打幾次混勻,13,000rpm 離心1 分鐘。將所有收集的濾出液混合。
      4 .將總濾出液混勻后加入吸附柱中(溶液過(guò)多時(shí)可分次加入),13,000rpm 離心30-60 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放入收集管中。
      5 .向吸附柱中加入 600μl 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),13,000rpm 離心30-60 秒,倒掉廢液,將吸附柱重新放入收集管中。
      6 .向吸附柱中加入 600μl 漂洗液,13,000rpm 離心30-60 秒,倒掉廢液。
      7 .將離心吸附柱放回收集管中,13,000rpm 離心2 分鐘,盡量除去漂洗液。將吸附柱開(kāi)蓋置于室溫 1-2 分鐘,徹底晾干,以防止殘留的漂洗液影響下一步的實(shí)驗(yàn)。
      8 .將吸附柱放到一個(gè)干凈離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加適量 65–70℃預(yù)熱的洗脫緩沖液 20-30μ l ,室溫放置2 分鐘。13,000rpm 離心2 分鐘收集DNA溶液。注意:①為了增加回收效率,可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,13,000rpm 再次離心1 分鐘。②洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 20 μ l ,體積過(guò)小影響回收效率。③洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5 之間。
      9 .DNA回收產(chǎn)物直接后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者-20 ℃保存。
      注意事項(xiàng):
      1 .電泳時(shí)最好使用新的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果。
      2 .切膠時(shí),紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短,以免對(duì) DNA造成損傷。
      3 . 本試劑盒對(duì)<50bp DNA 片段回收效率偏低(30% 左右),如要回收,應(yīng)加大結(jié)合液的體積,延長(zhǎng)吸附和洗脫的時(shí)間。
      4 .回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān),初始量越少、洗脫體積越小,回收率越低。
      性狀 試劑盒內(nèi)容: 20T 50T
      溶液A 5ml 15 ml
      溶液B 20ml 50 ml
      漂洗液 15ml 15ml
      洗脫液 1.5ml 1.5ml
      研磨杵 20個(gè) 50個(gè)
      過(guò)濾柱 20個(gè) 50個(gè)
      吸附柱    20個(gè) 50個(gè)
      說(shuō)明書(shū) 1份 1份
      貯存 室溫(15 ℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12 個(gè)月,2 ℃-8 ℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。
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