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      RNA病毒基因組提取試劑盒

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      別 名
      Cas號
      M D L
      分子式
      分子量
      產品參數 產品簡介:

      本試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組,不適合于細胞等組織內RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實驗。



      操作步驟:

      使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇,加入到離瓶口約0.5-1cm距離,蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進行。

      1、 取病毒上清液0.5ml,12000rpm離心5min,盡量吸盡上清使用,棄去沉淀(如無沉淀可省去此步)。

      2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,65℃消化10min,期間可顛倒離心管混勻數次。

      3、 吸附柱前處理:從包裝中取出吸附柱,放入收集管中,加入700ul 洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8℃ 12000 rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中待用。

      4、 向病毒上清中加入500ul結合液,充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響RNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,靜置2min。(吸附柱的最大容積為750ul,可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。)

      5、 12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      6、 向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      7、 向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      8、 12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。

      10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經65℃水浴預熱的RNase free ddH2O,室溫放置5min,12000rpm離心2min。即可得到高質量的病毒基因組RNA。

      注意事項:

      1、經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌,可能導致RNase污染。使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

      2、樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的RNA提取量也下降。

      3、若結合液中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解。

      4、如果樣品消化不徹底,后面的離心步驟中可能會出現堵柱子的情況,可適當延長離心時間。

      5、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過小會影響回收效率。

      6、RNA產物應保存在-70℃,以防RNA降解。

      7、RNA檢測:得到的基因組RNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關。由于病毒不含有核糖體RNA,所以常規電泳無法檢測,只有后期實驗才可檢測到。D260值為1相當于大約40 μg/ml單鏈RNA。
      性狀 試劑盒組成 50 100
      蛋白酶K 1ml 2ml
      洗柱液 50ml 50ml×2
      結合液 25ml 50ml
      漂洗液 15ml 30ml
      RNase free ddH2O 15ml 15ml×2
      RNase free吸附柱 50個 100個
      RNase free收集管(2ml) 50個 100個
      貯存 室溫(15℃-25℃)干燥條件下可保存12個月,更長時間的保存可置于2℃-8℃。
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